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　　1.開始運行儀器

　　打開電腦，打開定量PCR儀底座開關啟動CFX Manager軟件。

　　2.放置樣品

　　將PCR反應體系加入到0.2ml低緣八聯管，蓋上管蓋；或加入低緣96孔板，用光學級封膜封好。注意，必須帶一次性塑料手套，不要讓手指接觸到反應管表面。將反應管按順序放入儀器的加熱孔中。

　　3.設置程序，運行實驗

　　定量PCR軟件操作基本步驟為：

　　a.設置熱循環程序文件（Protocol Tab），點擊Edit（編輯）或Create New（創建新程序）。

　　b.設置反應板文件（Plate Tab），選擇本次實驗所要使用的熒光染料種類；單擊樣品類型；如要某些反應孔第一熒光染料對應的樣品類型為標準品（Standard），點擊“Dilution Series”鍵可設置其標準品濃度及稀釋倍數。。

　　c.點擊“Start Run”鍵，單擊open lid（打開熱蓋）或Close lid（關閉熱蓋）放置樣品；單擊Start Run，保存文件，開始運行程序。

　　4.結果分析

　　PCR反應結束后，軟件會自動計算標準曲線和Ct值等。如需進行表達量分析、等位基因分析等，在軟件窗口選擇相應分析功能。點擊右上方的“Report”鍵，還可輸出結果報告單。

　　5.關閉運行儀器

　　實驗結束后取出反應管，順序關閉CFX Manager軟件、定量PCR儀電源，關閉電腦。